國產(chǎn)細(xì)胞培養(yǎng)基常見問題及解決方法（一）

1.血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？

 基于多年的實(shí)驗(yàn)研究，用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清以及其它血清中可能會(huì)存在以下種類的沉淀物：

（1）磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁，并且在 37℃ 培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。

（2）纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到 1-2mm，可以用肉眼觀察到。 因?yàn)檠宥际窃诘蜏叵逻M(jìn)行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白 的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態(tài)，當(dāng)經(jīng)過 后的過濾分裝后，就會(huì)在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖 維蛋白沉淀。

（3）膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。

2.血清中的沉淀物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有什么影響？

（1）細(xì)胞生長。我們的試驗(yàn)以及經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血 清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。

（2）過濾。如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因?yàn)樵谘迳a(chǎn)時(shí)已經(jīng)經(jīng)過 100nm 或者 40nm 的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴(yán)格的無菌檢測，因此不推薦再過濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。

（3）污染。磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭端，研究者可能會(huì)在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會(huì)比較警覺的去做無菌試驗(yàn)，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結(jié)果可能會(huì)觀察到更多的絮狀沉淀，可能就斷定血清被污染了。建議不要直接將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進(jìn)行培養(yǎng)以觀察是否有細(xì)菌生長。另外，也可以進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認(rèn)是否有污染。

3.如何避免血清中沉淀物的出現(xiàn)？

 首先要注意正確的血清解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動(dòng)血清。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：

（1）熱滅 清；

（2）在 37℃下培養(yǎng)血清；

（3）γ射線照射；

（4）反復(fù)凍融；

（5）在室溫下放置時(shí)間過長；

（6）長期儲(chǔ)存在 2-8℃；

4.如何去除血清中的沉淀？

 如想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無菌離心管中，以 400g 離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。

注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。